Флуориметр настольный Qubit 2.0 Invitrogen / Life

Как часто нужно калибровать прибор и обязательно ли делать это перед каждым измерением?

Калибровку необходимо выполнять для каждого нового набора реагентов (кита) и при использовании новой партии разведённого рабочего раствора, даже если тип анализа тот же. Стандартная процедура — двухточечная калибровка по двум стандартам, входящим в комплект. Без калибровки прибор не сможет пересчитать флуоресцентные единицы (RFU) в концентрацию. Результаты, полученные без предварительной калибровки, недостоверны.

Почему Qubit 2.0 показывает сообщение «Out of Range» и как это исправить?

Сообщение «Out of Range» появляется, если флуоресцентный сигнал образца превышает сигнал верхней калибровочной точки или выходит за пределы динамического диапазона анализа. Чаще всего это происходит, когда концентрация целевой молекулы слишком высока. Решение: разведите образец в несколько раз чистой водой или буфером, снова измерьте и умножьте полученную концентрацию на коэффициент разведения. Обязательно используйте правильный тип анализа (например, dsDNA Broad Range вместо High Sensitivity, если ожидается высокая концентрация).

Можно ли использовать для измерений обычные пробирки объёмом 1.5 мл или кюветы?

Нет. Qubit 2.0 откалиброван только под тонкостенные пробирки для ПЦР объёмом 0.5 мл (thin‑wall PCR tubes). Использование других типов пробирок (толстостенных, большего объёма, кювет) приведёт к значительной погрешности, так как изменяется геометрия оптического пути и уровень жидкости. Всегда применяйте пробирки, рекомендованные производителем (например, Qubit Assay Tubes).

Как правильно очищать измерительный отсек и экран прибора?

Для очистки используйте мягкую безворсовую ткань, слегка смоченную водой или 70% этанолом. Никогда не наливайте жидкость непосредственно в измерительный отсек. При загрязнении образцом (проливе) немедленно выключите прибор, аккуратно удалите жидкость, просушите и протрите отсек влажной тканью, затем сухой. Абразивные чистящие средства и органические растворители (ацетон, фенол) могут повредить корпус и оптику. Перед чисткой обязательно отключите прибор от сети.

Какие USB-накопители подходят для экспорта данных и обновления прошивки?

Qubit 2.0 распознаёт не все современные флеш‑накопители. Производитель рекомендует использовать USB‑накопители объёмом не более 2 ГБ, отформатированные в FAT или FAT32. Накопители большого объёма (8 ГБ и выше), а также скоростные USB 3.0 часто не распознаются. Перед использованием в приборе отформатируйте флешку на компьютере, удалив все посторонние файлы. Если прибор не видит накопитель, попробуйте другой, более старой модели.

Нужно ли учитывать время инкубации после смешивания образца с реагентом?

Да, точное соблюдение времени инкубации критически важно для точности. Для анализа ДНК и РНК требуется 2 минуты инкубации при комнатной температуре после перемешивания. Для белкового анализа — 15 минут. Увеличение времени инкубации может привести к постепенному изменению сигнала из-за фотовыцветания или неспецифического связывания. После инкубации образцы следует измерять незамедлительно; не рекомендуется оставлять их в пробоподготовленном состоянии на длительное время.

Можно ли использовать реагенты из наборов Qubit после истечения срока годности?

Производитель не гарантирует точность результатов, если используются просроченные реагенты или стандарты. Красители и стандартные растворы могут деградировать, что приводит к снижению флуоресцентного сигнала и неправильной калибровке. Если вы вынуждены использовать старый набор, обязательно проверьте его на образце с известной концентрацией и при малейших сомнениях замените на новый.

Как создать и загрузить пользовательский метод (MyQubit)?

1. Разработайте протокол на основе флуоресцентного красителя, который возбуждается синим или красным светодиодом прибора и излучает в диапазоне, соответствующем его фильтрам.
2. На компьютере создайте текстовый файл с расширением .qbt, описывающий параметры анализа (длины волн, количество стандартов, единицы измерения).
3. Скопируйте файл на USB‑накопитель (до 2 ГБ).
4. В меню прибора выберите «MyQubit» → «Add New Assay» и укажите путь к файлу на накопителе. После успешной загрузки метод появится в меню и будет доступен для выбора.

Что означает сообщение «Standard #1 error» или «Standard #2 error» при калибровке?

Это указывает на то, что флуоресцентный сигнал одного из стандартов не соответствует ожидаемому значению. Причины: неправильно приготовленный рабочий раствор, использование воды вместо буфера, загрязнение пробирок, недостаточное перемешивание или пузырьки воздуха в растворе. Приготовьте свежие стандарты строго по инструкции, тщательно перемешайте (избегая пенообразования) и повторите калибровку.

Прибор не включается или экран не загорается. С чего начать?

Проверьте подключение блока питания к сети и к прибору. Используйте только оригинальный блок питания с выходом 9 В DC, 1.33 А. Убедитесь, что розетка исправна. Если питание подано, но дисплей не реагирует, попробуйте выключить и снова включить прибор с интервалом в 10 секунд. При отсутствии реакции возможно повреждение внутреннего предохранителя или блока питания — обратитесь в сервисный центр.

Как долго можно хранить уже приготовленный рабочий раствор (Working Solution)?

Рабочий раствор, полученный разведением концентрата красителя в буфере, следует использовать в течение нескольких часов. При хранении его флуоресцентные свойства могут изменяться. Для каждой серии измерений рекомендуется готовить свежую порцию рабочего раствора. Остатки разведённого реагента не подлежат длительному хранению и должны быть утилизированы.

Можно ли использовать Qubit 2.0 для измерения концентрации плазмидной ДНК напрямую из минипрепарата?

Да, но следует помнить о специфичности анализа. Qubit измеряет только двухцепочечную ДНК (dsDNA), если используется соответствующий набор. Однако многие минипрепараты содержат примеси РНК, которые не будут обнаружены (это преимущество по сравнению с A260). Важно убедиться, что концентрация ожидаемо попадает в диапазон выбранного набора (Broad Range или High Sensitivity), иначе результат будет за пределами обнаружения.

Какой объём образца реально требуется для анализа?

Согласно протоколу, для приготовления реакционной смеси нужно от 1 до 20 мкл образца. Рекомендация: для точности используйте 10–20 мкл, если концентрация неизвестна. Минимальный объём 1 мкл допустим, но требует высокой аккуратности при пипетировании.

Можно ли автоклавировать пробирки для Qubit?

Нет, тонкостенные пробирки для ПЦР не рассчитаны на автоклавирование. Они поставляются чистыми и свободными от ДНКаз/РНКаз. При необходимости их можно облучить ультрафиолетом в течение 10–15 минут, но проще использовать новые пробирки из только что открытой упаковки.